实验室PCR实验污染』的解决办法!

PCR污染是每个实验室都多多少少会遇到的问题。原因在于,PCR是非常灵敏的一项检测,100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增,从而容易出现DNA污染导致的假阳性。那么,怎样远离PCR的污染呢?

你的实验结果受到污染的影响了吗?

“易查不易察”,污染来的悄无声息,防不胜防,假阳性结果让无数生物学子抓狂和崩溃

小编今天就来扒一扒生物实验室污染之PCR实验污染你不知道的事

在众多的生物实验室,分子生物学检测方法如PCR因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,所以对环境污染的控制也极为严格。面对众多的污染源,比如样本交叉污染、试剂仪器交叉污染、克隆质粒污染、PCR扩增产物污染、还有极容易忽视的气溶胶污染,气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,在空气与液体面摩擦时,比如在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由其造成的污染是一个非常重要而被忽视的污染源。

虽然这些污染对PCR实验结果的影响已经受到了广泛重视,多数实验室对污染控制都采取了各种办法,比如定期大扫除清理、划分操作区域、试剂分装、操作谨慎、重复实验、多角度验证结果。但是微量的核酸片段就能被扩增,所以对污染物的控制不仅仅是做到这些就能够杜绝和避免的,关键是需要从源头控制。目前多数生物试验室,分子实验每天都在大规模进行,污染源已经无处不在,特异性的,非特异性的,同源的,非同源的,广泛分布在样本容器、实验室台面,试剂溶液中、仪器表面内管附着等等,你以为普通的清理就能解决这些污染源吗?必须是不行的,实验室大拿们都为了清除这些污染源研究出好多种方法,整理跟大家共享。

常见的防止污染的方法,推荐给大家

合理的实验室分区

实验室内各工作区的实验用品,包括移液器等应专用。如有可能,应在装有紫外灯的层流式工作台(如生物安全柜、超净工作台)内,吸加PCR试剂,工作台内应放置PCR专业用的微量离心机、一次性手套、各量程的移液器和其他必须物品。

首先,要辨别PCR污染的来源。设立阴阳性对照,有利于检测反应体系各成分的污染情况。尤其是设立空白对照,即包括PCR的全部组分,而不加模板DNA,这对检测试剂中PCR产物残留污染是非常有益的。 

在排除试剂污染的可能性外,更换试剂后,若不久又发现试剂被污染了,则考虑可能为环境污染。环境污染的最主要原因是DNA溶液的溅出和DNA气溶胶造成的实验区域的污染,这尤其在PCR产物扩增区容易出现。移液器枪头和EP管架是也较常见的污染部位。

如果是环境污染,还可对每个区域进行涂抹采样和核酸提取,以最终鉴定污染的区域所在。德国Minerva Biolabs公司专门生产有DNA污染监测试剂盒(货号181-0010和182-0010),比较方便使用。